Tinción de esporas (técnica de Shaeffer-Fulton)

Tinción de esporas (técnica de Shaeffer-Fulton)

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Objetivos de la práctica Introducción Partes de la práctica :
Métodos de Tinción
Observación al microscopio
Tinción de Gram
Tinción de endosporas
Tinción de ácido-alcohol resistencia
Movilidad
Autoevaluación
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Estructura y formación de las endosporas están descritas en este curso.Encontrará información más completa sobre las endosporas bacterianas en los apuntes on line del Profesor E. Iañez .

Fundamentos

La envuelta de la endospora es mas compleja e impermeable que la envuelta de las células vegetativas en las que se forma. Sólo se puede teñir el contenido de la espora alterando su envuelta. La impermeabilidad de las cubiertas dificulta que las endosporas se decoloren una vez teñidas.

El verde de malaquita es un colorante débilmente básico (tiene una carga positiva débil) y por tanto, se une débilmente a la bacteria. Penetra en las células vegetativa . Cuando se calienta la preparación también penetra las endosporas.

Durante el lavado con agua, el verde de malaquita se elimina de las células vegetativas, pero no de la endospora.

El colorante de contraste (la safranina) solo puede teñir a las células vegetativas (decoloradas por el agua).

Material Necesario

Para el correcto desarrollo de esta práctica serán necesarios los siguiente materiales: cultivos de Bacillus subtilis y de Bacillus megaterium. Verde malaquita al 5 % en agua y Safranina al 1% en agua. Platina de Koch.

Método

image025 1. Cubrir la extensión con papel de filtro (dificulta la precipitación del colorante sobre las bacterias).
image027 2. Depositar la preparación sobre una platina de Koch. Añadir verde de malaquita. Esperar un minuto.

image029 image037 3. Seguir la tinción con calor : en emisión de vapores durante 5-10 minutos. Dejar enfriar.

image031 4. Lavar con agua abundante. Secar.
image035 image037 5. Teñir con safranina (dos minutos). Lavar con agua. Secar. Observar con objetivo de inmersión.

Resultado

image039Esporas teñidas de verde y células vegetativas teñidas de rosa. Observar la forma, tamaño relativo y posición de la espora en la célula vegetativa.

Objetivos de la práctica Introducción Partes de la práctica :
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Tinción de endosporas
Tinción de ácido-alcohol resistencia
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